Clostridium thermocellum으로부터 새로운 제한효소 CthII의 분리

Abstract

Clostridium thermocellum(ATCC 27405) 2g(wet weight)으로부터 새로운 type II 제한효소인 CthII를 분리하여, 그 효소의 생화학적 특성을 연구하였다. CthII는 DEAE-Cellulose와 Phosphocellulose chromatography를 통하여 분리하였다. 두번째 column인 Phosphocellulose column을 통해 나온 fraction들 중 이미 발견된 CthI peak보다 나중의 fraction들에서 이 효소가 발견되었다. CthII는 5-CC${\uparrow}$ (A/T) GG-3를 인식하며 화살표로 표시한 위치를 절단하는 효소임이 밝혀졌다. 이 효소의 반응을 위한 최적온도는 55℃였으며, Mg2＋ 존재하에 pH 8과 pH 9 사이에서 최대활성을 보여주었다. 또한 이 효소는 NaCI이 없는 상태에서 정상적인 효소 활성을 보여주었고, NaCl 농도가 100 mM 이상일 때는 그 효소 활성이 감소됨을 관찰하였다. CthII는 BstNI과 ZanI과 같이 dcm-methylated DNA(5-$C^{me}C$(A/T)GG-3)도 정상적으로 절단할 수 있는 특성도 있음이 발견되었다.