Assay of β-galactosidase using high performance liquid chromatography.

Abstract

유당분해효소의 활성도를 정량하기 위하여 고속액체크로마토그래피(HPLC)를 사용하는 방법을 확립하였다. Aminex HPX-87C 컬럼 및 RI 검출기를 사용하여 유당, 글루코스 및 갈락토스를 12 분 이내에 정량적으로 분석할 수 있었다. 컬럼 온도는 85℃로 고정하였으며 이동상으로는 탈이온화된 증류수를 사용하였다. ONPG(ortho-nitrophenol-β-D-galactopyranoside)를 이용하는 발색법의 결과와 비교하여, 고속액체크로마토그래피에 의한 유당분해효소 활성도 측정법의 타당성을 고찰하였으며, 그 결과 ONPG 방법과 고속액체크로마토그래피 방법에 의한 효소활성도 측정의 실험결과에는 큰 차이가 없었으며, 고속액체크로마토그래피를 사용하는 경우에는 420 ㎚에 대한 방해 작용이 있는 기질에서도 유당분해효소의 활성도를 측정할수있는 장점을 가짐을 확인하였다.

영문 An analytical procedure is presented for the quantitative determination of lactose, glucose, and galactose in the hydrolyzate of lactose by ß-galactosidase with high-performance liquid chromatography. An Aminex HPX-87C column at 85℃ and refractive index detector were used to resolve lactose, glucose, and galactose in only 12 minutes with distilled and deionized water as a mobile phase. The validity of high-performance liquid chromatography as a method for the assay of β-galactosidase was supported by recovery experiments and comparision of results with those by ONPG method, a spectrophotometric assay. The procedure was appropriate for determination of sugars in the enzyme reaction mixture and could by applied to analysis of β-galactosidase activity.