세포 내 분비단백질의 위치 정보를 제공하는 방법

Abstract

본 발명은, 근접 표지(proximity labeling) 시스템 세포 내 분비단백질 경로에 적용함으로써 목적하는 세포 소기관 또는 세포로부터 분비되는 분비단백질을 표지하고, 동정 및 추적함으로써 상기 분비단백질의 종류 및 위치를 확인할 수 있는, 세포 내 분비단백질의 위치 정보를 제공하는 방법에 관한 것이다. 보다 상세하게는, 목적 단백질에 바이오틴 결합효소를 부착하여 세포에서 발현시키는 단계; 상기 세포에 바이오틴을 처리하여 상기 목적 단백질이 위치하는 세포 소기관의 분비단백질을 바이오틴으로 선택적 표지하는 단계; 상기 세포를 용해하여 세포 용해물을 수득하는 단계; 상기 세포 용해물을 원심분리 후 상층액만 회수하는 단계; 상기 상층액에 스트렙타비딘 비드를 첨가하여 펩티드를 수득하는 단계; 및 상기 수득된 펩티드를 분석하여 상기 세포 내 분비단백질의 위치를 확인하는 단계;를 포함하는, 세포 내 분비단백질의 위치 정보를 제공하는 방법에 관한 것이다. 본 발명에 따르면, 소포체 막 단백질의 소포체 내강 방향인 C-말단에 바이오틴 결합효소를 부착함으로써 소포체 내강에서 합성되는 분비단백질을 선택적으로 바이오틴 표지할 수 있으며, 그에 따라 분비단백질의 종류 및 위치 정보를 배양세포 수준뿐만 아니라 실제 동물 모델에서도 보다 정확도 높게 동정할 수 있으므로, 기초 생명과학연구, 의약 개발, 및 의료 진단 마커 연구 등에 폭 넓게 활용할 수 있다.