본 발명은 단백질공학기법을 이용하여 서브틸리신 J유전자상에서 염기서열을 변형시킴으로써, 열안정성이 야생형보다 더욱 증진된 돌연변이체 서브틸리신 J 및 그를 제조하는 방법에 관한 것이다. 본 발명에서 제조된 서브틸리신 J의49번 세린이 아스파라긴산으로 치환되고, 다시 58번 티로신이 결손된 이중 돌연변이체 서브틸리신 J는 고온에서의 자가분해 방지가 야생형보다 더욱 증진된 단백질 가수분해효소로서, 세제 및 식품 등의 여러 산업적 분야에 이용될 수 있을 것이다.