H.nipponia의 장내에 공생하는 세균이 합성하는 단백질분해효소에 관한 연구

Abstract

한국산흡혈거머리인 H.nipponia를 실험실에서 대량 사육하는데 성공하였다. 혈전제의 개발을 목적으로 거머리의 인공적인 증식방법을 개발하는 한편, 거머리의 침샘이나 기타 조직에서 합성될 수 있는 혈전 생성억제제ㅈ나 혈전분해효소 및 그외의 기작으로 효율적으로 작용할 수 있는 단백질제제의 개발을 시도하고 있다. 이러한 연구의 일환으로 본 연구에서는 거머리의 장내에서 혈액을 소화와 관련한 단백질분해효소와 공생미생물에 의한 단백질분해효소의 검색을 시도하였다. 이 연구를 통하여 한가지 종의 혈구를 분해하고 최소한 세가지 이상의 단백질분해효소를 합성하는 세균을 분리하였으며 이 균은 기존에 다른 거머리에서 발견된 균과는 다른 특성을 지니고 있었다. LB나 LB에 1\% casein을 첨가한 배지에서 이 균을 키우고 효소의 생성과 분리를 실험하였다. 이 균은 gelatin을 분해할 수 있는 세가지 종류의 단백질분해효소와 casein을 분해할 수 있는 단백질분해효소를 한가지 합성한다는 것을 밝혔다. 그리고 이 중 casein을 분해할 수 있는 효소를 sulfonilamide azocasein을 기질로 하여 측정하였고 또한 30 kDa-UF (ultrafil tration)과 DE-52 음이온 교환, 그리고 Sephadex G-150 gel filtration을 이용한 chromatography로 partial purification하였다. 분리된 효소를 여러가지의 억제인자실험과 기질분해해실험을 한 결과 대략 50-60 kDa의 단백질로 적정 pH는 7.3이고 Zn이온에 의존하는 중성단백질효소이며 특히 globulin계열의 단백질에 특이적으로 작용하는 endoprotease인 것을 밝혔다. 이 효소외의 다른 두 세가지의 단백질분해효소를 분리하고 있으며 이 효소들은 거머리가 혈액을 소화시키는데 있어 면역적인 장애의 극복이나, 응결된 혈액의 분해나 혈전의 제거에 기여하는 특이성을 각각 지닌 유용한 단백질분해효소일 것이라고 예측하고 있다. 본 연구는 앞으로 거머리의 장내에서 생산될 수 있는 fibrin분해효소를 분리하고 그 유용성을 검증할 것이다.