Bacillus subtilis 의 α-아밀레이즈의 분리 정제 및 특성연구

Abstract

Bacillus subtilis 의 $\alpha$-amylase 는 아밀로오즈나 아밀로펙틴의 $\alpha$-1,4-glucoside 의 결합을 가수분해하는 효소로서 배지에 포도당이 존재하면 효소 생성이 억제되는 억제 효소이다. 효소의 생성을 위하여 $Ca^{++}$ 이온과 $Fe^{+++}$ 이온을 필요로 하며 탄소원 (soluble starch)과 질소원 $((NH_4)_2HPO_4)$의 비가 3:1 일때 가장 좋은 효소 활성도를 나타낸다. Bacillus subtilis culture broth 로 부터 균체를 제거한 조효소 용액을 얻고 이것을 전분 흡착 크로마토그라피에 의해서 9배 가량 정제하고 다시 DEAE-Cellulose 이온교환 크로마토그라피를 통해서 3배 정도 더 정제시켰다. 조 효소 용액의 전분 흡착은 $0\,^\circ\!C$ 에서 30분동안 하였다. 위 두 과정을 통해서 얻은 효소의 전분(soluble starch) 에 대한 비활성도는 24 u mole/min/mg protein 이었으며, km 값은 $5.13 \times 10^{-3} g/ml$ 였다. 이 효소의 최적 pH 와 최적온도는 각각 5.5 - 6.5, 그리고 $45\,^\circ\!C - 55\,^\circ\!C$ 였다. 효소의 활성을 위해서는 Ca(II) 이 꼭 필요하며, 이 효소는 EDTA 에 의해서 강하게 저해를 받는다.