본 발명은 아트로박터 심플렉스 균주에 의해 히드로코티손을 델타-1-탈수소화하여 프레드니솔론을 제조하는 방법에 관한 것이다.프레드니솔론의 제조방법으로서 첫째, 화학적인 전환방법은 반응 후에 셀레늄 디옥시드를 제거해야 하기 때문에 공정상 어려움이 많고,둘째 미생물에 의한 전환방법은 20-히드록시 유도체가 부산물로 생기는 부반응을 억제하기 위하여 요오드아세테이트를 첨가하는 방법(미국특허 3,022,226호)이 있다.히드로코티손의 델타-1-탈수소화능이 있는 미생물을 사용하여 히드로코티손으로부터 프레드니솔론을 제조한다. 포도당 0-0.2그람,카스아미노산 0.1-1.0그람,KH2PO4 0.05-0.5그람,K2HPO4 0.05-0.5그람,MgCl2 0.001-0.1그람, 트윈 80 0.05그람 및 증류수 100 밀리리터의 조성을 갖는 배지를 이용하여 온도 30-37℃, PH 6-9 조건에서 프레드니솔론을 제조한다.