인체리포코틴을E.COLI에서생산시가용성인상태로생산정제하는방법및인체리포코틴CDNA서열을함유하는벡터

Abstract

본 발명은 인체 리코포틴을 유전자 재조합 기술에 의하여 생산하는 방법 및 이를 정제하는 방법에 관한 것이다.스테로이드 활성인 소염작용을 보이면서 스테로이드의 여러 부작용을 나타내지 않으므로 의약품으로의 이이 가능성이 큰 리코포틴을충분한 양 얻기 위해서는 유전자 재조합 기술을 이용하는 것이 바람직하며 유전자 운반체와 숙주 연구를 통해 가장 효율적인 생산법 확립이 필요하다.사람 태반에서 mRNA를 분리하고 이로부터 cDNA를 제조,플라스미드 벡터와 재조합시키고 이로서 대장균을 형질전환시켜 얻은 형질 전환 균체중에서 리포코틴 I을 코드하는 유전자를 가진 클론을 선별,플라스미드 pLCI을 제조한다. 이 pLCI을 절단하여 리포코틴 코드 유전자 절편을 분리하고 한편으로 플라스미드 pUC8을 처리해 제조한 벡터를 리포코틴 유전자가 포함된 절편 및 합성 올리고 뉴클레오티드 링커와 접합시켜 플라스미드 pLCI-S를 제조한다. 이를 다시 절단하여 리포코틴 유전자 절편을 분리하고 한편으로 플라스미드 pKK233-2로부터 중복 절단한 벡터를 제조하여 이를 리포코틴 유전자 절편과 접합시켜 플라스미드 pHT1을 제조한다. 이를 사용해 E.coli에서 가용성인 인체 리포코틴을 생산하고 분쇄용 완충액에 녹이고 원심분리,추출로 부분정제한 후 크로마토그래피로 순수 정제한다.