본 발명은 프리즘의 소산파를 이용한 바이오 시편 측정 장치 및 그 방법에 관한 것으로, 더욱 상세하게는 프리즘 내부 전반사를 2회 이상 발생하게 하는 효과에 의해 발생하는 복수의 소산파를 바이오 시편의 형광 검출에 이용하여 보다 고민감도의 형광 검출을 제공함과 동시에, 서로 다른 투과율과 반사율의 면을 갖는 프리즘을 이용하여 형광 검출 과정에서 에너지 손실을 최소화하는 소산파를 이용함으로써, 고효율로 바이오 시편의 형광 검출이 가능한 프리즘의 소산파를 이용한 바이오 시편 측정 장치 및 그 방법에 관한 것이다.