시알산 함량이 높은 재조합 당단백질의 제조 방법

Abstract

본 발명은 시알산 함량이 높은 재조합 당단백질의 제조 방법에 관한 것으로, 더욱 상세하게는 263번 아미노산인 아르기닌을 류신으로 치환하거나, 또는 263번 아미노산인 아르기닌을 류신으로 치환하고 266번 아미노산인 아르기닌을 글루타민 또는 트립토판으로 치환하여 점 돌연변이를 유도한 UDP-GlcNAc 2-epimerase/ManNAc kinase(GNE/MNK) 효소는, 시티딘모노포스페이트(cytidine monophosphate, CMP)-시알산의 농도에 상관없이 에피머라제(epimerase)의 활성이 지속적으로 유지되고, 이를 과발현시킨 세포는 세포 내 CMP-시알산의 함량이 증가하며, 특히, 상기 점 돌연변이가 유도된 GNE/MNK, 인간 알파-2,3 시알산당전이효소 및 CMP-시알산 수송단백질 유전자를 동시에 과발현시킨 당단백질(에리스로포이에틴 또는 트롬보포이에틴) 생산 숙주세포에서는 세포 내 CMP-시알산 및 당단백질의 시알산 함량이 증가하므로, 상기 3가지 유전자의 시알산결합을 가진 재조합 당단백질 생산 숙주세포에서의 과발현은 시알산 함량이 증가된 당단백질의 제조에 유용하게 이용될 수 있다.