트랜스포존과 Cre/loxP 부위 특이적 재조합 방법을 이용하는 염색체의 특정부위가 제거된 미생물 변이주 제조방법

Abstract

본 발명은 트랜스포존(transposon)과 Cre/loxP 부위 특이적 재조합(site-specific recombination) 방법을 이용하여, 염색체의 특정부위를 선택적으로 제거하여 새로운 미생물 변이주를 제조하는 방법에 관한 것으로, 더욱 상세하게는 선별 마커(selectable marker)와 loxP 부위(loxP site)를 가진 트랜스포존과 Cre 발현벡터를 이용하여 미생물 염색체의 특정부위를 제거함으로써 염색체가 축소된 새로운 미생물 변이주를 제조하는 방법에 관한 것이다.이를 위하여, 본 발명은 (1) 선별 마커와 loxP 부위를 가진 트랜스포존을 제조하는 단계, (2) 상기 트랜스포존을 미생물 염색체의 임의의 위치에 삽입시키고 삽입된 위치를 확인하는 단계, (3) 서로 다른 선별 마커를 가진 트랜스포존을 하나의 염색체로 옮기는 단계, (4) 상기 염색체에 Cre 발현벡터를 도입하여 두 loxP 부위 사이의 염색체 부위를 제거하는 단계, 및 (5) 상기 염색체 일부가 제거된 변이주에 상기 (3) 및 (4) 단계를 반복하여 점진적으로 염색체를 축소시키는 단계를 포함하여 이루어진다.트랜스포존, Cre/loxP 부위 특이적 재조합