본 발명은 활성산소를 감지하는 히알루론산 금 나노입자(Hyaluronic acid immobilized gold nanoparticles) 및 이의 제조방법에 관한 것으로서, 보다 상세하게는 생분해성과 생체적합성을 가진 히알루론산에 히알루로니다아제를 첨가하여 저분량 히알루론산을 제조하는 단계;와 상기 저분자량 히알루론산의 카르복실기에 형광염료를 도입하며, 환원 말단에는 금 나노입자 표면에 고정화 시킬 수 있는 기능기를 도입하여 저분자량 히알루론산 합성물을 제조하는 단계; 및 상기 저분자량 히알루론산 합성물을 금 나노입자 표면에 고정하는 단계;를 포함하는 것을 특징으로 하는 활성산소를 감지하는 히알루론산 금 나노입자 및 이의 제조방법에 관한 것이다. 본 발명인 히알루론산이 고정된 금 나노입자는 세포내의 활성산소와 민감하게 반응하여 올리고 히알루론산이 분해됨으로써, 세포내에서 특이적인 상황에 의해 발생하는 활성산소의 양을 민감하게 측정할 수 있다.