리포좀에의한빙핵활성단백질의빙핵활성촉진방법

Abstract

본 발명은 빙핵활성을 지닌 미생물인 슈도모나스 시링가(Pseudomonas Syringae)로부터 분리,정제한 빙핵 활성 단백질의 빙핵 활성을 촉진시키는 방법에 관한 것이다.식물상해방지 등의 목적으로 활발하게 연구되어온 빙핵 활성 단백질을 생산하는 균주 연구의 일환으로 빙핵 활성 세균인 슈도모나스 시링가로부터 빙핵활성 단백질을 정제하여 빙핵 활성을 촉진시키는 방법으로 리포솜에 재구성시켰다.글리세롤이 함유된 배지에서 배양한 슈도모나스 시링가를 원심분리하여 세포를 모아 슈크로스 용액에 세척한 후 같은 용액에 현탁시킨다. 세포외막 분리를 위해 리소짐으로 처리하고 세포외막 현탁액에 비변성 계면활성제를 처리,막 단백질을 용해하며 불용물질은 초원심분리로 제거한다. 상청액은 세파크릴 에스-400 겔 크로마토그래피하며 용출분획중 Void Volume 가까이 첫번째 분획에서만 빙핵 활성이 나타나며 이 분획을 전기영동하여 분자량 10만 달톤 이상 젤을 잘라 전기적 용출법으로 15만 달톤의 순수 빙핵 활성 단백질을 분리한다. 이 빙핵 활성을 촉진시킴에 있어 포스파티 딜이노시톨(PI)과 포스파티딜 콜린(PC)을 3:7의 비로 만든 리포솜에 재구성시킬 때 가장 효과적이며 포스파티딜 이노시톨의 농도에 비례하여 빙핵활성도가 증가한다.