차세대 시퀀싱 기반 재조합 단백질 발현을 위한 세포 내 핫스팟 영역 탐색 방법

Abstract

본 발명자들은 재조합 유전자 고발현을 위한 CHO 세포 핫스팟 영역 탐색 방법을 고안하기 위해, 강화된 녹색 형광 단백질(enhanced green fluorescent protein; eGFP)을 발현하는 벡터를 유전체 내 통합한 CHO 세포주를 구축하였으며, GFP를 고발현하는 CHO 세포주를 자동 세포 침착 장치를 갖춘 유세포 분석기를 통해 1차 분리하고, 한계 희석법을 통한 단일 클론 획득으로 2차 분리한 후 타겟 PCR을 통하여 eGFP 유전자의 삽입 위치를 증폭하고 차세대 시퀀싱을 통하여 해당 유전자 삽입 위치의 서열을 획득하였으며, 서열 분석을 통한 핫스팟 영역을 찾아내었다.